培養基,是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養物質組合配制而成的營養基質。
一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質。培養基既是提
供細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質,也是細胞生長和繁殖的生存環境。
培養基種類很多,根據配制原料的來源可分為自然培養基、合成培養基、半合成培養基;根據物理狀態可
分為固體培養基、液體培養基、半固體培養基;根據培養功能可分為基礎培養基、選擇培養基、加富培養
基、鑒別培養基等;根據使用范圍可分為細菌培養基、放線菌培養基、酵母菌培養基、真菌培養基等。
培養基配成后一般需測試并調節 pH,還須進行滅菌,通常有高溫滅菌和過濾滅菌。培養基由于富含營養
物質,易被污染或變質。配好后不宜久置,zui好現配現用。
培養基制備過程
1.配料
配方換算→在容器中加入少量水(蒸餾水,自然水)→按照配方稱取各種藥品(依次加入)→加足所需水
量(一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋)。
2.溶解
淀粉溶解:少量冷水調成糊狀。加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度
95-97℃ ,且需要邊加熱邊攪拌以防止燒焦。
3.調 PH
用 1N 的鹽酸或 1N 的 NaOH 把培養基調節到所要求的值。
4.過濾
濾紙或棉花進行過濾。(有時可以省去) [4]
5.分裝
一般培養基放在三角瓶或試管中滅菌使用。
(1)三角瓶
若作靜置培養,則 100ml 培養基/250ml 的三角瓶,zui多不能超過 150ml 培養基/250ml 的
三角瓶,否則滅菌時培養基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養,則 15-20ml 培養基/250ml 的
三角瓶,保證通氣良好。
(2)試管分裝
液體培養基一般裝 4-5ml,約試管的 1/4 高度;
固體斜面培養基一般裝 3-4ml,約試管的 1/5 高度。
6.包扎
分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時水份進入把棉塞弄濕。
7.滅菌
按配方上要求的溫度、壓力進行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營養成分會被破壞,培養
基中的糖、氨基酸會使培養基的顏色變深。
8.擺斜面
滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放,使其凝固成為一個斜面,約占試管長度的 1/2。
9.貯存
培養基在 30℃下放置一天,無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于 2-8℃冰箱中備用
培養基配制好后為什么必須立即滅菌?
大家都知道,培養基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養料。由于微生物具有不同的營養類型,對營養
物質的要求也各不相同,加之實驗和研究的目的不同,所以培養基的種類很多,使用的原料也各有差異。
為了達到實驗和研究的目的,要按照培養基的配方進行配制。而任何一種培養基一經制成就應及時*滅
菌,以備純 培養用。一般培養基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。
發酵過程中,培養基滅菌主要有以下幾個原因:如不滅菌,會使生物反應的基質或產物,因雜菌的消耗而
損失,造成生產能力的下降;雜菌也會產生代謝產物,這 就使產物的提取更加困難,造成得率降低,產品
質量下降;雜菌大量繁殖后,會改變反應液的 pH 值,使反應異常;有些雜菌會分解產物,使生產失敗;如果發
生噬 菌體污染,生產菌細胞將被裂解,使生產失敗。
培養基滅菌是殺滅培養基中本身的原著菌或在空氣中附著的雜菌,更好的讓目標菌生長(減少雜菌消耗培養
基中的營養,而且有些雜菌會抑制你目標菌的生長)。一般人工培養菌基本上是盡可能讓其生長快速或者產
生代謝產物,因此就讓其在zui適培養基上生長,以減少培養時間與提高經濟效益。
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